PRRSV 2b蛋白互作宿主细胞蛋白的筛选

论文摘要

目的通过酵母双杂交筛选技术从猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophages,PAM）c DNA文库中筛选与猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）2b蛋白互作的宿主细胞蛋白。方法将PRRSV 2b基因扩增产物克隆至p GBKT7质粒上,构建重组钓饵载体p GBKT7-2b,转化至Y2H Gold酵母感受态中制备钓饵菌株后,进行自激活和毒性检测;将PAM c DNA文库菌株与钓饵菌株进行杂交融合,经DDO/X/A平板筛选后,对筛选的菌株进行PCR鉴定及测序分析。结果构建的钓饵菌株无毒性和自激活现象;共获得LGALS1、RPL12、LGALS3和RPS20 4种蛋白。结论成功构建了可用于双杂交筛选的钓饵菌株,筛选出4种与PRRSV 2b蛋白互作的PAM蛋白,其中LGALS1出现概率最高。

论文目录

1 材料与方法

1.1 菌株、载体、毒株及细胞

1.2 主要试剂及仪器

1.3重组钓饵载体的构建

1.4 钓饵菌株的制备及鉴定

1.5 互作宿主细胞蛋白的初步筛选

1.6 阳性克隆的鉴定

1.7 阳性克隆的基因序列分析

2 结果

2.1 钓饵菌株的鉴定

2.1.1 2b基因扩增产物的鉴定

2.1.2 钓饵菌株的鉴定

2.1.3 钓饵载体插入基因的鉴定

2.1.4 钓饵菌株的毒性和自激活

2.2 互作蛋白的鉴定

2.3 阳性菌落的鉴定

2.4 基因序列分析

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 崔一龙,邓守全,杨达汉,薛江东,马德慧

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒,蛋白,互作蛋白,猪肺泡巨噬细胞

来源: 中国生物制品学杂志 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古民族大学动物科学与技术学院,内蒙古自治区肉牛疾病防控工程技术研究中心

基金: 国家自然科学基金资助项目(31460662),内蒙古自治区自然科学基金项目(2017MS0319)

分类号: S852.651

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002560

页码: 403-407

总页数: 5

文件大小: 376K

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